關(guān)于HPLC的常見問題及解答

一、問:用HPLC進(jìn)行分析時保留時間有時發(fā)生漂移，有時發(fā)生快速變化，原因何在？如何解決？
答:關(guān)于漂移問題：
1． 溫度控制不好，解決方法是采用恒溫裝置，保持柱溫恒定
2． 流動相發(fā)生變化，解決辦法是防止流動相發(fā)生蒸發(fā)、反應(yīng)等
3． 柱子未平衡好，需對柱子進(jìn)行更長時間的平衡
關(guān)于快速變化問題
1． 流速發(fā)生變化，解決辦法是重新設(shè)定流速，使之保持穩(wěn)定
2． 泵中有氣泡，可通過排氣等操作將氣泡趕出。
3． 流動相不合適，解決辦法為改換流動相或使流動相在控制室內(nèi)進(jìn)行適當(dāng)混合
二、問:液相色譜中峰出現(xiàn)拖尾或出現(xiàn)雙峰的原因是什么？
答: 1． 篩板堵塞或柱失效，解決辦法是反向沖洗柱子，替換篩板或更換柱子。
2． 存在干擾峰，解決辦法為使用較長的柱子，改換流動相或更換選擇性好的柱子
三、問：HPLC靈敏度不夠的主要原因及解決辦法
答: 1． 樣品量不足，解決辦法為增加樣品量
2． 樣品未從柱子中流出。可根據(jù)樣品的化學(xué)性質(zhì)改變流動相或柱子
3． 樣品與檢測器不匹配。根據(jù)樣品化學(xué)性質(zhì)調(diào)整波長或改換檢測器
4． 檢測器衰減太多。調(diào)整衰減即可。
5． 檢測器時間常數(shù)太大。解決辦法為降低時間參數(shù)
6． 檢測器池窗污染。解決辦法為清洗池窗。
7． 檢測池中有氣泡。解決辦法為排氣。
8． 記錄儀測壓范圍不當(dāng)。調(diào)整電壓范圍即可。
9． 流動相流量不合適。調(diào)整流速即可。
10． 檢測器與記錄儀超出校正曲線。解決辦法為檢查記錄儀與檢測器，重作校正曲線。
四、問：做HPLC分析時，柱壓不穩(wěn)定，原因何在？如何解決？
答：原因可能有：
1． 泵內(nèi)有空氣，解決的辦法是清除泵內(nèi)空氣，對溶劑進(jìn)行脫氣處理；
2． 比例閥失效，更換比例閥即可；
3． 泵密封墊損壞，更換密封墊即可；
4． 溶劑中的氣泡，解決的辦法是對溶劑脫氣，必要時改變脫氣方法；
5． 系統(tǒng)檢漏，找出漏點(diǎn)，密封即可；
6． 梯度洗脫，這時壓力波動是正常的。
五、問：我購買的HPLC柱驗(yàn)收測試時柱壓過高，請問為什么？
答：柱壓過高是HPLC柱用戶最常碰到的問題。其原因有多方面，而且常常并不是柱子本身的問題，您可按下面步驟檢查問題的起因。
1． 拆去保護(hù)預(yù)柱，看柱壓是否還高，否則是保護(hù)柱的問題，若柱壓仍高，再檢查；
2． 把色譜柱從儀器上取下，看壓力是否下降，否則是管路堵塞，需清洗，若壓力下降，再檢查；
3． 將柱子的進(jìn)出口反過來接在儀器上，用10倍柱體積的流動相沖洗柱子，（此時不要連接檢測器，以防固體顆粒進(jìn)入流動池）。這時，如果柱壓仍不下降，再檢查；
4． 更換柱子入口篩板，若柱壓下降，說明您的溶劑或樣品含有顆粒雜質(zhì)，正是這些雜質(zhì)將篩板堵塞引起壓力上升。若柱壓還高，請與廠商聯(lián)系。 一般情況下，在進(jìn)樣器與保護(hù)柱之間接一個在線過濾器便可避免柱壓過高的問題，SGE提供的Rheodyne 7315型過濾器就是解決這一問題的最佳選擇。